{"id":1430,"date":"2023-05-11T10:05:04","date_gmt":"2023-05-11T14:05:04","guid":{"rendered":"https:\/\/microscopiaumss.com\/?page_id=1430"},"modified":"2023-10-19T14:27:05","modified_gmt":"2023-10-19T14:27:05","slug":"muestra-biologica","status":"publish","type":"page","link":"http:\/\/microscopia.fcyt.umss.edu.bo\/index.php\/muestra-biologica\/","title":{"rendered":"Muestra Biologica"},"content":{"rendered":"\n
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MUESTRA BIOL\u00d3GICA<\/p>\n\n\n\n

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Para obtener una imagen de una muestra biol\u00f3gica con SEM, la muestra necesita una superficie conductora y debe colocarse dentro de un alto vac\u00edo; debido a la naturaleza intr\u00ednseca de las interacciones de electrones y materia que son responsables de la formaci\u00f3n de im\u00e1genes. Por lo tanto, los espec\u00edmenes biol\u00f3gicos no se pueden visualizar en su estado original y deben procesarse intensamente. Por ello, la preparaci\u00f3n de la muestra es un paso crucial.<\/p>\n<\/div>\n<\/div><\/div>\n\n\n\n

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PASO 1<\/div>

Fijaci\u00f3n primaria con aldeh\u00eddos (prote\u00ednas)<\/h4>

Las prote\u00ednas se entrecruzan con glutaraldeh\u00eddo y formaldeh\u00eddo para estabilizar la ultraestructura antes del procesamiento posterior.<\/p>

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PASO 1<\/div><\/article>\n\n\n\n
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PASO 2<\/div>

fijaci\u00f3n secundaria con tetr\u00f3xido de osmio (l\u00edpidos)<\/h4>

Las membranas lip\u00eddicas se fijan para evitar su extracci\u00f3n por solventes durante la deshidrataci\u00f3n. El precipitado de osmio negro que se forma durante este proceso aumenta la conductividad de la muestra y minimiza las distorsiones de imagen resultantes de la carga.<\/p>

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PASO 2<\/div><\/article>\n\n\n\n
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PASO 3<\/div>

Serie de deshidrataci\u00f3n con solvente (etanol o acetona)<\/h4>

Una muestra fijada se deshidrata mediante incubaci\u00f3n en una serie de soluciones de etanol o acetona. La concentraci\u00f3n de solvente se aumenta gradualmente para que el agua se elimine suavemente, sin causar la contracci\u00f3n de la muestra. <\/p>

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PASO 3<\/div><\/article>\n\n\n\n
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PASO 4<\/div>

secado<\/h4>

Permitir que la acetona o el etanol simplemente se evaporen de la superficie de la muestra crear\u00eda microdesgarros en la superficie al salir, ya que estos solventes tienen una tensi\u00f3n superficial relativamente alta. para evitar esto, los solventes de deshidrataci\u00f3n se reemplazan con hexametildisilazano (HMDS) o CO2 l\u00edquido. HMDS se puede utilizar en preparaciones de c\u00e9lulas y despu\u00e9s de una incubaci\u00f3n corta (3 minutos) se elimina y el exceso se deja evaporar. El CO2 l\u00edquido, por otro lado, se aplica a los tejidos en un secador de punto cr\u00edtico donde se lleva a una temperatura y un punto de presi\u00f3n cr\u00edticos en los que se vaporiza
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PASO 4<\/div><\/article>\n\n\n\n
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PASO 5<\/div>

montaje en un trozo<\/h4>

La muestra se monta en un trozo de metal usando un disco de carbono pegajoso que aumenta la conductividad. adem\u00e1s, se puede aplicar pegamento que contiene plata para obtener a\u00fan m\u00e1s conductividad.<\/p>

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PASO 5<\/div><\/article>\n\n\n\n
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PASO 6<\/div>

Recubrimiento por pulverizaci\u00f3n cat\u00f3dica con material conductor <\/h4>

Para evitar la acumulaci\u00f3n de carga en la superficie de la muestra, se recubre con un material conductor, generalmente oro. El metal se aplica de forma controlada en un dispositivo de pulverizaci\u00f3n cat\u00f3dica. Es fundamental que el recubrimiento sea lo suficientemente grueso para evitar la carga (normalmente alrededor de 10 nm) pero no lo suficientemente grueso como para oscurecer los detalles de la superficie de la muestra.<\/p>

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PASO 6<\/div><\/article>\n
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Para algunas aplicaciones avanzadas, tendr\u00e1 que aplicar la cr\u00edo-fractura y posiblemente cr\u00edo-grabar las muestras. <\/p>\n\n\n\n

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Otro M\u00e9todo<\/div>

Observaci\u00f3n de muestras criofijadas<\/h4>

El microscopio electr\u00f3nico de barrido (SEM) puede dotarse de un sistema capaz de observar la muestra a muy baja temperatura de forma que su preservaci\u00f3n estructural es m\u00e1xima y la capacidad de trabajo del microscopio no se afecta en absoluto, pues ya no tratamos con una muestra hidratada sino congelada.
El proceso se inicia fuera del microscopio, enfriando la muestra a la m\u00e1xima velocidad posible mediante nitr\u00f3geno nieve. A continuaci\u00f3n ya pasa al sistema de crio-observaci\u00f3n, donde se puede fracturar, sublimar el hielo superficial y recubrir con oro o carbono para su observaci\u00f3n y\/o an\u00e1lisis.

La ventaja de este sistema es que se puede observar cualquier muestra biol\u00f3gica o hidratada con una preparaci\u00f3n m\u00ednima y r\u00e1pida con una buena preservaci\u00f3n estructural.<\/p>

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Otro M\u00e9todo<\/div><\/article>\n\n\n\n
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\u00bfPara qu\u00e9 aplicaciones se utiliza la cr\u00edo-fractura? <\/h4>

Para revelar las estructuras finas internas de una muestra biol\u00f3gica u org\u00e1nica.

Generalmente, la cr\u00edo-fractura se utiliza para aplicaciones biol\u00f3gicas, como la investigaci\u00f3n de estructuras subcelulares, por ejemplo, org\u00e1nulos y membranas. Sin embargo, m\u00e1s recientemente la t\u00e9cnica se ha vuelto interesante para ciertas aplicaciones en la ciencia de los materiales y la f\u00edsica en relaci\u00f3n con las capas y emulsiones. <\/p>

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